Серологическая диагностика паразитарных заболеваний

Основой диагностики паразитарных болезней, в частности гельминтозов, являются результаты лабораторных исследований, которые выявляют непосредственно возбудителей, их антигены или антитела к ним.

Гельминтозы развиваются в результате инвазии (заражения) организма окончательного хозяина (человека или животного), используемого как место обитания гельминтов и источника их питания. Часто болезни протекают без выраженных специфических клинических симптомов, что не всегда позволяет поставить диагноз по клинической картине.

Диагностика гельминтозов должна быть комплексной и основываться на данных эпидемиологического анамнеза, клиники заболевания и лабораторных исследований.

Специфика биологии каждого конкретного вида гельминта диктует необходимость различной тактики лабораторных исследований, которая направлена на обнаружение в одних случаях гельминтов или их фрагментов, а в других – их личинок, яиц или специфических иммуноглобулинов.

Материал для исследования берется в зависимости от подозрения на наличие у больного того или иного гельминтоза, так как пути выделения яиц, личинок или фрагментов паразитов из организма человека могут быть разными.

Для геогельминтов характерен кишечный (интестинальный) путь выделения яиц и личинок из организма больного человека. Большинство гельминтов, яйца которых выводятся через кишечник, паразитируют в пищеводе, желудке, кишечнике, а также попадают в кишечник при миграции через легкие, бронхи, трахеи, гортань, когда происходит заглатывание яиц и личинок со слизью при кашле. Этот путь присущ трематодам, цестодам и многим нематодам (в частности, геогельминтам). Материалом для исследования служат фекалии (кал). При исследовании проб фекалий обнаруживаются яйца и личинки многих гельминтов.

Паразитологические методы лабораторных исследований применяются:

• с диагностической целью;
• для контроля эффективности лечения;
• для оценки качества проведенного комплекса лечебно-профилактических мероприятий;
• для установления уровня пораженности населения (при профосмотрах)

Лабораторная диагностика является важным методом при паразитарных заболеваниях. В то же время качество лабораторной диагностики зависит от множества факторов, таких как надлежащая подготовка пациента к лабораторному обследованию, правильный забор материала для исследования и выбор оптимальной методики, квалификация и опыт специалиста-лаборанта.

Для верификации диагноза важно обеспечить следующее:

• сбор данных эпидемиологического анамнеза;
• определение соответствующего материала для исследования, правильно собранного и доставленного вовремя;
• выбор и применение соответствующего метода идентификации паразита;
• правильная идентификация паразита;
• правильная интерпретация результатов исследования.

Cбор материала для гельминтологических исследований включает следующие шаги:

1. Для исследования собирают фекалии из любой чистой емкости немедленно после дефекации.
2. Не допускается сбор образцов фекалий из унитаза.
3. Для детей возможен сбор образца с пеленки, подгузника или горшка.
4. Используя ложку в крышке контейнера, собрать не менее чем из трех точек стула.
5. Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию не позднее одних суток после дефекации, а при подозрении на стронгилоидоз – немедленно.
6. Если по каким-либо причинам доставка в лабораторию затруднена, то необходимо хранить материал при температуре +4–8 °C. Рекомендуется использование консерванта, и тогда исследование можно проводить в течение 3–10 дней после дефекации.

Методы лабораторной диагностики гельминтозов

Методы гельминтологических исследований делятся на прямые и опосредованные (косвенные).

Прямые методы: выявление самих гельминтов, их фрагментов, яиц, личинок в фекалиях, моче, дуоденальном секрете, мокроте и др.

Опосредованные (косвенные) методы: выявление вторичных изменений, возникающих в организме человека в результате жизнедеятельности паразита, путем серологических реакций, общего исследования крови, мочи.

Основным методом лабораторной диагностики глистных инвазий является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях. Наиболее распространенными методами исследования фекалий являются гельминтокопроскопические.

Гельминтокопроскопия – это совокупность методов взятия, обработки и исследования (макро- и микроскопического) проб фекалий человека с целью обнаружения в них яиц, личинок гельминтов, их фрагментов. Она включает следующие виды исследований:

• копроовоскопия (исследование фекалий на яйца гельминтов);
• копроларвоскопия (исследование фекалий на личинки гельминтов);
• макроскопия фекалий (обнаружение фрагментов или зрелых гельминтов в фекалиях).

Микроскопические методы подразделяются на простые, сложные и специальные.

К простым относятся метод нативного мазка и метод толстого мазка под целлофаном по Като – Кац.

Сложные методы, или методы обогащения, основаны на феномене разных удельных весов яиц гельминтов и применяемых реагентов. При обработке фекалий этими растворами происходит концентрация яиц на поверхности раствора или в осадке, в результате чего увеличивается эффективность поиска.

Различают следующие методы обогащения:

• флотационные (когда используют солевые растворы, удельный вес которых выше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они всплывают в поверхностную пленку, которую и исследуют);
• седиментационные (когда используют растворы, удельный вес которых меньше удельного веса яиц гельминтов, в результате чего они оседают, образуя осадок).

Методом седиментации возможно определить следующие гельминтозы: описторхоз, клонорхоз, фасциолез, дикроцелиоз, метагонимоз, нанофиетоз, дифиллоботриоз, гименолепидоз, аскаридоз, трихоцефалез, анкилостомидозы, стронгилоидоз, трихостронгилез, некатороз, шистосомоз, кишечные протозоозы (лямблиоз,криптоспоридиоз, изоспороз)

Специальные методы чаще всего необходимы для обнаружения личинок гельминтов. Группа специальных методов направлена на диагностику конкретного геогельминтоза, применяемый метод специфичен только для данного гельминта.

Модификация эфир-формалинового метода седиментации
одноразовыми системами для проведения копрологического исследования

С развитием паразитологии в лечебную практику стали применяться одноразовые системы для копрологического исследования, предназначенные для эффективного концентрирования яиц и личинок гельминтов модифицированным эфир-формалиновым методом.

Системы для копрологического исследования являются одноразовыми и состоят из нескольких элементов:

• пробирка для образца, в которую имеется готовая смесь для фиксации образца фекалий и последующей седиментации
• пробирка с системой фильтров и шпателем для забора образца;
• коническая емкость для сбора отфильтрованного материала.

Система фильтров способствует оседанию грубых частиц непереваренной пищи и клетчатки в смесительной камере, а жидкая часть с выделившимися в нее паразитами, яйцами паразитов под давлением фильтруется и центрифугируется в конической пробирке.

Читайте также:  У ребенка болит живот после моря

После получения взвеси систему помещают в центрифугу и центрифугируют при скорости 2500–3000 об/мин в течение 1–3 минут, при скорости 1500 об/мин – 5 минут. В конической части пробирки остается жидкая часть пробы с выделившимися в нее яйцами гельминтов, цистами простейших. Отсоединяют модуль с фильтром и утилизируют после обеззараживания. Коническая часть пробирки остается для микроскопирования. Для этого из нижней части пробирки с помощью пипетки переносят на предметное стекло 2 капли пробы осадка. Микроскопируют при увеличении: окуляр x10, объективы x10, x40.

Преимущества использования одноразовых систем для копрологических исследований:

• повышает выявляемость возбудителей;
• уменьшает расход реагентов;
• снижает опасность контаминации, исключая контакт персонала с исследуемыми образцами;
• улучшает стандартизацию метода, повышает достоверность анализа;
• исключает подготовку и повторную обработку посуды, а также сокращает количество отходов в процессе проведения исследования

Комплексное лабораторное обследование для выявления основных гельминтозов и протозойных инфекций человека, включающее общеклинические и специфические тесты.

Анализы для диагностики гельминтозов и протозойных инфекций.

Синонимы английские

Laboratory diagnosis of protozoal and helminthic infections; CBC, Stool Ova and Parasites test, Cellulose tape test, Protozoal and Helminthic Serology.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь, кал, отпечаток с перианальной области.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить из рациона алкоголь в течение 24 часов до исследования.
• Детям в возрасте до 1 года не принимать пищу в течение 30-40 минут до исследования.
• Детям в возрасте от 1 до 5 лет не принимать пищу в течение 2-3 часов до исследования.
• Не принимать пищу в течение 8 часов до исследования, можно пить чистую негазированную воду.
• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.
• Полностью исключить (по согласованию с врачом) прием лекарственных препаратов в течение 24 часов перед исследованием.
• Исключить физическое и эмоциональное перенапряжение в течение 30 минут до исследования.
• Не курить в течение 30 минут до исследования.
• Сбор биоматериала на исследование проводится только утром (до 10:00), до дефекации. Накануне взятия биоматериала не проводить туалет кожных покровов в области ануса и ягодиц.

Общая информация об исследовании

Гельминтозы и протозойные инфекции наблюдаются повсеместно и особенно распространены среди детей и людей, по роду деятельности контактирующих с домашними и дикими животными. Как правило, инфицирование человека является одним из этапов развития гельминтов или простейших. Многие из паразитов имеют фекально-оральный механизм передачи инфекции и по крайней мере на одном этапе жизненного цикла поражают различные отделы пищеварительного тракта. Несмотря на то что некоторые гельминтозы и паразитозы человека имеют специфические клинические признаки, в целом дифференцировать эти заболевания на основании клинической картины очень сложно. Основную роль в диагностике этих заболеваний играют лабораторные тесты. С учетом того, что у одного и того же человека может наблюдаться сочетание нескольких гельминтозов и паразитозов, рекомендуется выполнение сразу нескольких тестов или, что более удобно для врача и пациента, комплексного анализа на распространенные гельминтозы и паразитозы.

Комплексное лабораторное обследование включает общеклинические и специфические анализы на самые распространенные и важные в клиническом плане гельминтозы и протозойные инфекции. Общеклинические тесты: общий анализ крови, лейкоцитарная формула, анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших.

Общий анализ крови и лейкоцитарная формула используются для того, чтобы определить, является ли гельминтоз или паразитоз инвазивным, и также позволяет выявить возможные осложнения, связанные с инфекцией (анемию). Об инвазивности гельминтозов и паразитозов свидетельствует эозинофилия. Она характерна для амебиаза, эхинококкоза, описторхоза, токсокароза, трихинеллеза и аскаридоза (в фазу миграции личинок). Эозинофилия не характерна для кишечного аскаридоза, энтеробиоза и лямблиоза. Любая длительно текущая инфекция может приводить к развитию анемии (анемии хронического заболевания). Гельминтозы и паразитозы, протекающие с изъязвлением слизистой оболочки пищеварительного тракта (например, амебиаз), приводят к развитию железодефицитной анемии.

Анализ кала на яйца гельминтов и анализ кала на цисты простейших включают макроскопическую оценку кала (цвет, консистенция, наличие крови, избытка слизи, макроскопически определяемых паразитов), микроскопию нативного образца кала (наличие цист простейших – трофозоитов, личинок и взрослых особей гельминтов) и микроскопию окрашенного мазка кала (наличие цист и трофозоитов). Анализ кала на яйца гельминтов позволяет выявить большинство кишечных нематод, цестод и трематод. Анализ кала на цисты простейших позволяет выявить Giardia lamblia, Entamoeba histolytica, Balantidium coli и других простейших. Учитывая, что поступление яиц гельминтов или цист простейших в кал может носить непостоянный характер, однократное исследование кала малоинформативно — рекомендуется исследование трех образцов кала. Следует учитывать, что при некоторых гельминтозах (например, описторхоз) появление яиц в кале начинается только через 2-4 недели после возникновения симптомов заболевания. Отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.

К специфическим тестам для диагностики гельминтозов и паразитозов относятся серологические тесты и анализ на энтеробоз.

Echinococcus, IgG – определение специфических антител IgG к возбудителю эхинококкоза (Echinococcus granulosus или Echinococcus multilocularis). Чувствительность серологических тестов в отношении E. granulosus при поражении печени (самая частая локализация) составляет около 80 %, при поражении других органов (легкие, головной мозг, кости скелета) – несколько ниже.

Читайте также:  У ребенка схватками болит живот

Opistorchis, IgG — определение специфических антител IgG к возбудителю описторхоза (Opistorchis felineus или Opistorchis viverrini). Из-за невысокой специфичности серологические тесты являются дополнительным способом диагностики описторхоза (главный тест – анализ кала на яйца гельминта).

Toxocara, IgG, титр — количественное определение специфических антител IgG к возбудителю токсокароза (Тохосаra canis). Серологические тесты обладают достаточно высокой чувствительностью (78 %) и специфичностью (92 %) и могут служить хорошим дополнением или даже альтернативой «золотому стандарту» диагностики данного заболевания — микроскопическому исследованию биопсии ткани, содержащей личинки гельминта (частая локализация – печень и легкие), учитывая, что многие пациенты с токсокарозом — маленькие дети.

Учитывая системный характер таких инфекций, как эхинококкоз, описторхоз и токсокароз, при подозрении на эти заболевания проводят дополнительные обследования, в том числе оценку функции печени.

Trichinella, IgG — определение специфических антител IgG к возбудителю трихинеллеза (Trichinella spiralis и родственные виды). Серологические тесты становятся положительными через 3 недели после инфицирования. Учитывая, что личинки гельминта поражают мышечную ткань, при данном заболевании также могут быть повышены следующие клинико-лабораторные маркеры: креатинкиназа (КК), лактатдегидрогеназа (ЛДГ) и аспартатаминотрансфераза (АСТ).

Ascaris lumbricoides, IgG — определение специфических антител IgG к возбудителю аскаридоза. Аскаридоз – это самый распространенный гельминтоз человека. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики аскаридоза (главный тест – выявление взрослых особей в области рта и ануса, а также анализ кала на яйца гельминта).

Giardia lamblia, антитела — определение специфических антител к возбудителю лямблиоза. Серологические тесты являются дополнительным способом диагностики лямблиоза (главный тест — анализ кала на цисты паразита). Серологический тест становится отрицательным через 1 год после перенесенной инфекции. Также может быть использован тест на антиген G. lamblia в кале.

Энтеробиоз – распространенный гельминтоз, вызываемый Enterobius vermicularis (острица). Яйца остриц не выделяются с калом, поэтому микроскопическое или любые другие исследования кала не применяются. Лабораторная диагностика энтеробиоза осуществляется с помощью специального метода — микроскопического исследования мазков-отпечатков с кожи перианальной области. Микроскопическое исследование позволяет произвести дифференциальную диагностику энтеробиоза с аскаридозом, а также другими неинфекционными заболеваниями, сопровождающимися зудом перианальной области (контактным дерматитом, сахарным диабетом). Учитывая повышенную активность самки в ночные часы, оптимально производить мазок-отпечаток с утра, до совершения утреннего туалета.

Комбинация общеклинических и специфических тестов позволяет достичь наибольшей точности при диагностике гельминтозов и паразитозов. При эффективном лечении изменения, выявленные в общеклинических тестах, нормализуются, а яйца/личинки/взрослые особи гельминтов или цисты простейших перестают определяться, но серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики кишечных гельминтозов и протозойных инфекций.

Когда назначается исследование?

• При обследовании детей и людей из группы риска заражения гельминтами и простейшими (ветеринары, фермеры, работники, занятые в санитарно-гигиентической сфере);
• при наличии признаков глистной инвазии или протозойной инфекции: хронической диареи, мальабсорбции, тошноты, потери веса, а также признаков реакции гиперчувствительности (крапивницы и других сыпей);
• при оформлении ребенка в детский сад, лагерь, бассейн, при госпитализации.

Что означают результаты?

Для каждого показателя, входящего в состав комплекса:

В норме яйца, личинки и взрослые особи гельминтов, цисты и вегетативные формы простейших в кале отсутствуют. Их обнаружение свидетельствует о текущей инфекции.

Серологические тесты могут оставаться положительными в течение некоторого времени даже при эффективном лечении.

Что может влиять на результат?

• Время, прошедшее с момента заражения: яйца гельминтов и цисты простейших могут быть обнаружены через 2-4 недели и позже после заражения.
• Характер и скорость образования яиц гельминтов и цист простейших: часто наблюдается прерывистый характер их поступления в кал, что может привести к получению ложноотрицательного результата и обуславливает необходимость исследования трех, а не одного образца кала.

• Для получения точного результата необходимо следовать рекомендациям по подготовке к тесту;
• результат комплексного анализа следует интерпретировать с учетом анамнестических, клинических и инструментальных данных;
• отрицательный результат исследований не позволяет полностью исключить наличие гельминтоза или паразитоза.

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, педиатр, инфекционист.

Жизнедеятельность паразитов в организме вызывает недомогания неясной этиологии. Это могут быть кожные высыпания, метеоризм, изжога, тошнота, слабость, анемия, боли в суставах. Для уточнения диагноза, следует сделать специальные анализы на паразитов.

Как провериться на паразитов в организме человека

Классифицикация паразитов по их виду:

Для представителей некоторых профессий (для персонала предприятий общественного питания, детских учреждений) анализ на яйца глистов обязателен при оформлении санитарных книжек. Такой же анализ сдают дети при поступлении в детские сады и ясли или в спортивную секцию.

• Классическое исследование на глистов, живущих в желудочно кишечном тракте, это анализ кала и соскоб слизистой из прямой кишки.
• Но есть несколько вариантов более эффективных анализов крови на паразитов, по назначению и по методике.

Видео, какие анализы показывают наличие глистов

Классические исследования на глистов

Классическое исследование на глистов, живущих в ЖКТ (желудочно кишечном тракте), например, острицы, аскариды, это анализ кала и соскоб слизистой из прямой кишки. Но одноразовый анализ кала может не показать положительных результатов, поэтому целесообразно сделать три раза.

Видео, какими гельминтами может заразиться человек

Виды анализов крови на паразитов

Есть несколько вариантов анализов крови на паразитов: по назначению и по методике. Каждый из этих методов имеет свои достоинства и недостатки. В зависимости от применяемой методики существует следующие виды исследований крови:

1. ИФА или иммуноферментный анализ крови;
2. ПЦР или полимеразная цепная реакция;
3. Гемосканирование;
4. Серологический анализ крови.

ИФА, анализ на антитела и иммуноглобулины

Данный анализ основан на иммунном ответе организма, уровне его защитной реакции на инвазии паразитов.

• С помощью результатов ИФА можно определить наличие гельминтов в организме и их вид. Точность исследования гораздо выше, чем анализ кала.
• В основе метода – подсчёт антител в организме к тому или иному виду паразитов, определение их связи с чужеродными антигенами (иммунный ответ) и ферментной реакции тела.
• Комплексы антитела-антигены свидетельствуют о наличии заражения.
• Анализ крови методом ИФА имеет точность, по мнению разных специалистов, от 60% до 90% даже при малом уровне инвазии.
• Преимущество метода, кроме высокого уровня точности, заключается в том, что иммуноферментным анализом можно отслеживать динамику заболевания во времени.

Показатели и ммуноферментного анализа крови (ИФА)

Анализ на наличие антител выглядит как набор символов, обозначающих эти антитела или иммуноглобулины.

• Всего изучено 5 из них – IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.
• В практической медицине значение имеют первые три иммуноглобулина.

М – первый и основной маркер острой фазы заболевания,

• появляется в крови на пятые сутки,
• выявляется анализом через 6 недель.
• Затем он начинает быстро исчезать.

Е – используется в основном в практике выявления паразитов,

• является маркером процессов, связанных с аллергиями,
• в крови циркулирует мало, базируется в слизистых, макрофагах и базофилах,
• участвует в иммунных ответах на заражение паразитами.

По разным комбинациям плюсов и минусов в анализе крови на паразитов можно сделать следующие выводы:

1. отсутствие инфекции – все антитела с минусом;
2. острая стадия – IgG (+/-), IgA(+\-), IgM(+);
3. хроническая форма – IgG (+/-), IgA(-), IgM(-);
4. наличие иммунитета – IgG (+), IgA(-), IgM(-);
5. обострение хронического заболевания – IgG (+), IgA(+), IgM(+)
6. Если болезнь выявлена и пролечена, то минусовые значения всех антител будут достигнуты только через полгода после курса лечения, иногда после 1-2 лет.

Достоверность анализа ИФА

Метод ИФА дает уровень достоверности 90% для диагностики заражения аскаридами, острицами (энтериобиоз), токсокарами и другими, которые вызывают образование в крови иммуноглобулина IgG в больших количествах.

1. Определить лямблиоз можно по раздельному и общему (ОПд) значению уровня антител в крови.
2. Значение ОПд более 1 говорит о том, что заражение есть или было,
3. при значении менее 0,85 лямблий нет.
4. Если значение в промежутке, то целесообразно повторить анализ через 2 недели.

Данный метод характеризуется рядом слабых мест. Анализ позволяет определить уровень антител, выработанных в организме для обезвреживания гельминтов, а не самих глистов.

• Поэтому возможно получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
• Происходит это и при приёме пациентами лекарств,
• нарушении обмена веществ и наличии параллельно текущих хронических заболеваний.

Видео, о глистах, школа доктора Комаровского

Общий анализ крови, изменения при заражении паразитами

Косвенно заподозрить наличие инвазии можно, сделав общий анализ крови. Так как наличии глистов поражает внутренние органы, то продукты их жизнедеятельности попадают в кровь, изменяя ее состав. Частичный перечень результатов воздействия инвазии на параметры крови:

Если нет иных причин для подобных отклонений, целесообразно включить в программу диагностики специальный анализ крови на паразитов, ИФА, ПЦР.

Видео, о грибках — паразитах

Полимеразная цепная реакция ( ПЦР анализ)

Метод ПЦР является одним из самых современных и точных для диагностики крови на присутствие паразитов в организме. Он заключается в обнаружении следов ДНК и РНК, принадлежащих паразитарным формам жизни.

• Суть полимеразной реакции состоит в обработке крови таким образом, чтобы скопировать и размножить ДНК, РНК инородных организмов до концентрации, позволяющей их определить.

Серологический анализ крови

При этом анализе используется в качестве источника информации сыворотка крови.

• Исследуются иммуногенные реакции антител на антигены паразитов.
• Анализ позволяет выявить большое количество паразитарных форм, но не позволяет определить стадию инвазии.
• Как и метод ИФА, серологический анализ являются косвенным для диагностики.
• Если значения ОПд высокое, желательно дополнительно сдать анализ кала.

Видео, гемосканирование, анализ крови на паразитов

Диагностика, методом гемосканирования крови

Как сдавать анализ крови на паразитов

Сдача крови на наличие паразитов проводится в специализированной лаборатории. Кровь на анализ забирается из локтевой вены в количестве 3-5 мл и помещается в сухую стерильную пробирку. Перед тем, как сдать анализ, рекомендуется:

1. не принимать пищу в течение 8 часов;
2. в вечерний приём пищи отказаться от жирных блюд и молока;
3. не принимать алкоголь и газированные напитки;
4. избегать излишних физических нагрузок, физиопроцедур, рентген облучения;
5. отказаться от приема медикаментов.
6. Обильное питьё приветствуется.
7. Условия сдачи крови на ПЦР менее жёсткие, т.к. степень сытости не влияет на наличие ДНК паразитов.

Видео, 5 продуктов, убирающих паразитов

Сроки выполнения анализов

• Результаты анализов ИФА и серологического выдаются в течение недели.
• Для ПЦР анализа крови и гемосканирования достаточно пары часов.
• С полученным результатом анализа обязательно следует обратиться к врачу.

Видео, лямблии и лямблиоз