Кал на энтеровирус правила сбора

Анализ кала на энтеровирус (Enterovirus) методом ПЦР

Подготовка к исследованию:

• За 3 суток до получения биоматериала необходимо прекратить пользоваться любыми свечами и слабительными препаратами
• Исключить препараты белладонны, влияющие на перистальтику
• Исключить попадание крови или других биологических субстанций в материал

Тип биоматериала: кал

Синонимы (eng): Polymerase Chain Reaction Enterovirus

Методы исследования: ПЦР

Сроки выполнения: 1 день

Анализ кала на Enterovirus методом ПЦР относится к разновидности вирусологической диагностики и назначается по следующим показаниям:

• Есть подозрение на энтеровирусный менингит.
• Объективные симптомы герпетической ангины: воспалительные пузырьки на мягком небе.
• Миокардит неясной этиологии.
• Признаки полиомиелита: лихорадка, параличи и парезы лицевого нерва или нижних конечностей, боли в животе.
• Симптомы гастроэнтерита (спастические явления в животе, диарея, рвота, умеренное повышение температуры).

Кал следует сдавать до начала лечения противовирусными препаратами и не ранее, чем через 12 часов после отмены.

Обычно материал собирается после самостоятельной дефекации без применения клизм и слабительных. Приобретается одноразовая стерильная емкость с широким горлышком, которую необходимо заполнить не более чем на треть. Лаборатория может предложить собственную стерильную посуду. Не желательно попадание в пробы мочи или крови, поэтому рекомендуется воздержаться от сдачи анализа в дни менструации. Для ПЦР забор биоматериала должен проводиться в период максимальных клинических проявлений инфекции. Использовать следует одноразовую стерильную лопатку. Рекомендуется избегать сбора кала непосредственно из унитаза, так как это предмет общего пользования, а дезинфектанты могут вызвать разрушение вирусной РНК.

При необходимости, возможно хранение контейнера с калом в камере холодильника в течение 3 часов или в морозилке при -20⁰Cне более 8 часов.

Направляют специалисты, в чьей практике могут встречаться заболевания, вызванные энтеровирусами: педиатры, неврологи, инфекционисты, кардиологи, семейные врачи и даже стоматологи.

Очень часто пациенты при подготовке к сдаче анализа кала задают вопросы:

• Каким образом собрать биоматериал?
• Какое количество биоматериала достаточно для проведения исследования?
• Как длительно возможно хранение кала? Как быстро нужно доставить кал в лабораторию?

В этой статье мы постарались подробно ответить на каждый из них.

Итак, для того чтобы правильно собрать и доставить биоматериал (кал) в лабораторию необходимо учитывать следующие условия:

1. Емкость (контейнер) для сбора кала должны быть: одноразового использования, стерильный, пластиковый, с хорошо закрывающейся крышкой, желательно с встроенным шпателем/ложкой на крышке.
2. Сбор кала должен производиться сразу после естественной дефекации, использование клизмы запрещается.
3. При назначении исследований кала на фоне специальной диеты, ее характер должен быть указан при назначении анализа.
4. Рекомендуется отменить прием препаратов, влияющих на работу кишечника (слабительные, ректальные свечи), а также ферментов и препаратов, содержащих железо.
5. Детям сбор кала необходимо организовать при следующих условиях:
   • использовать горшок/судно, предварительно проведя дезинфекцию сосуда;
   • на дно горшка положить чистый лист бумаги;
   • кал собрать встроенным шпателем/ложкой на крышке в контейнер
   • недопустимо хранение кала в горшке, судне, др. сосудах, не предназначенных для сбора кала.
6. Кал не должен содержать примеси мочи, а также отделяемого женских и мужских половых органов.
7. Количество кала для лабораторного исследования 10-40г (это примерно 2 чайные ложки или 1 столовая ложка). Идеальный вариант сбора кала – утреннее время. К сожалению, на практике не всегда удается собрать биоматериал в утреннее время. Поэтому доставка биоматериала в лабораторию осуществляется в течение 2-4 часов после сбора кала, но не позднее 10-12 часов после дефекации при условии хранения в холодильнике при t +3-6 С. Исключение – бактериологические исследования кала – доставка в лабораторию должна осуществляться в течение 2-4 часов после дефекации, но не более 6 часов.
8. Гигиенический туалет наружных половых органов не требуется.

Для сбора биоматериала требуется подготовка в течение 3-5 дней на фоне специальной диеты, содержащей определенное количество белков, жиров, углеводов. Соблюдение данной диеты возможно только после консультации терапевта или педиатра.

Для сбора биоматериала необходимо исключить из рациона питания в течение 2-3 дней следующие продукты: мясо, рыбу, зеленые овощи, помидоры, препараты железа. Употребление вышеперечисленных продуктов могут дать ложноположительную реакцию.

Наиболее диагностическую значимость этот анализ имеет для детей до 1 года. Поэтому специальной подготовки не требует.

При назначении исследования необходимо заранее получить специальный контейнер в лаборатории.

Хранение биоматериала (кала) в домашних условиях не более 24 часов в холодильнике t +3-6 С. Длительное хранение биоматериала обеспечивает концентрат, находящийся в виде распыленного вещества на стенках контейнера, либо в виде раствора.

Специальной подготовки к данному анализу не требуется.

При назначении на исследования: дифференциальная ПЦР-диагностика инфекционных энтероколитов, антиген лямблий, антиген H.pylori, исследование кала на ротавирус, энтеровирус, норовирус – условия идентичные условиям при назначении исследования кала методом высокого концентрирования на фильтрах PARASEP.

Предварительная подготовка не требуется. Доставка биоматериала в лабораторию осуществляется в течение 2-4 часов после сбора кала, но не более 6 часов.

Исключение: биоматериал на бактериологическое исследование возбудителей дизентерии и сальмонеллеза – кал, мазок. Доставка в лабораторию кала не более 6 часов, а мазка – 72 часа (так как пробирка содержит транспортную среду с длительным сроком хранения).

Взятие мазка осуществляется только квалифицированным медицинским работником.

Взятие соскоба проводит квалифицированный медицинский работник.

Предварительная подготовка не требуется.

Исследование соскоба на гельминты проводят только в утреннее время, до дефекации. Гигиенический туалет наружных половых органов запрещается.

Выявление вирусов рода Enterovirus (Echovirus, Сoxsackievirus, Poliovirus), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяется генетический материал (РНК) вируса в образце биоматериала.

Энтеровирусы, энтеровирусная инфекция [полимеразная цепная реакция].

Синонимы английские

EV, RNA [polymerase chain reaction, PCR].

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Исключить прием слабительных препаратов, введение ректальных свечей, масел, ограничить (по согласованию с врачом) прием медикаментов, влияющих на перистальтику кишечника (белладонна, пилокарпин и др.), и препаратов, влияющих на окраску кала (железо, висмут, сернокислый барий), в течение 72 часов до сбора кала.

Читайте также:  Эрозия слизистой оболочки жкт

Общая информация об исследовании

Enterovirus – это группа РНК-содержащих вирусов, характеризующихся нуклеокапсидом в форме икосаэдра и отсутствием оболочки. Они относятся к семейству Picornaviridae, в которое также входят возбудитель вирусного гепатита А и риновирус.

Род Enterovirus объединяет несколько десятков различных вирусов, являющихся возбудителями целого спектра заболеваний человека: полиомиелита (Poliovirus), миокардита и перикардита (Сoxsackievirus В), вирусной пузырчатки полости рта и конечностей, герпетической ангины, асептического менингита и энцефалита (Сoxsackievirus A, Echovirus), а также более редких болезней. Для всех вирусов рода Enterovirus характерен схожий патогенез: попадание возбудителя в желудочно-кишечный тракт (фекально-оральный путь передачи), репликация в эпителиальных клетках слизистой оболочки ЖКТ и гематогенное распространение с поражением различных органов и тканей. Учитывая эти особенности заражения, основными биологическими средами для выявления Enterovirus являются отделяемое носоглотки, кал и ликвор. Как правило, острая инфекция Enterovirus протекает бессимптомно или в доброкачественной форме, а клиническая картина заболевания развивается лишь спустя некоторое время после первичного заражения. Эту особенность следует учитывать при выборе вида биоматериала, направляемого на анализ.

Для выявления возбудителя при подозрении на Enterovirus-ассоциированную инфекцию применяют серологические тесты, выделение вируса в культуре клеток и молекулярную диагностику.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в ликворе) фрагменты генетического материала (РНК) возбудителя инфекции. Она характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, а также позволяет получить результат в более короткие сроки по сравнению с большинством других анализов, что делает ее незаменимым инструментом для своевременной диагностики Enterovirus-ассоциированных инфекций.

ПЦР является «золотым стандартом» исследования ликвора для диагностики Enterovirus-ассоциированного менингоэнцефалита. Чувствительность такого анализа составляет 95-97 %, специфичность – 97-100 %. Благодаря этим преимуществам ПЦР заменила другой прямой метод идентификации возбудителя – выделение вируса в культуре клеток эмбриона. При этом исследование ликвора, полученного в первые 2 дня развития симптоматики менингоэнцефалита, характеризуется меньшей чувствительностью. Следует отметить, что вероятность обнаружить вирус при анализе нестерильных биологических сред (отделяемого носоглотки, кала) меньше, что необходимо учитывать при отрицательном результате анализа у пациента с клиническими признаками Enterovirus-ассоциированной инфекции. Большая частота ложноотрицательных реакций связана с полной элиминацией вируса из клеток ЖКТ к моменту развития симптомов заболевания (период репликации вируса в эпителии глотки составляет от 2 дней до 2 недель, в эпителии кишки – до 3 месяцев). Также ниже и специфичность метода при исследовании нестерильных сред, что связано с возможным «здоровым носительством» Enterovirus, сопутствующим клинически выраженному заболеванию, но не являющимся ее причиной.

ПЦР основана на непосредственном выявлении РНК вируса и может быть применена для выявления Enterovirus на раннем этапе болезни, что отличает ее от серологических (непрямых) методов, требующих около 2-4 недель для оценки динамики уровня выявляемых специфических антител. Однако по этой же причине ПЦР не позволяет различить острую и хроническую энтеровирусную инфекцию.

Читайте также:  Бросил курить живот болит

Благодаря тому, что в ПЦР выявляется общий для всех Enterovirus фрагмент РНК, она позволяет определить наличие любого представителя этого рода. Современные серологические методы разработаны только для 11 из более чем 70 вирусов рода Enterovirus. Однако по этой же причине с помощью ПЦР нельзя различить вирусы рода Enterovirus между собой, что имеет определенное значение в дифференциальной диагностике Enterovirus 71 – и Сoxsackievirus type A 16 – ассоциированного поражения нервной системы.

Диагностиказаболеваний, вызванных вирусами рода Enterovirus, представляет определенные трудности и требует проведения дополнительных лабораторных, а также инструментальных исследований.

Для чего используется исследование?

Для диагностики Enterovirus-ассоциированных инфекций:

• менингита;
• герпетической ангины;
• вирусной пузырчатки полости рта и конечностей;
• миоперикардита;
• полиомиелита.

Когда назначается исследование?

• менингита (головная боль, раздражительность, лихорадка, фотофобия, тошнота и не приносящая облегчения рвота, ригидность затылочных мышц);
• герпетической ангины (острое начало заболевания, лихорадка с температурой 39-40 ºС, головная боль, тошнота, рвота, болезненная шейная лимфаденопатия, везикулезная сыпь на слизистой оболочке миндалин, мягкого и твердого неба, боль при глотании);
• вирусной пузырчатки полости рта и конечностей у детей (лихорадка, кашель, везикулезная сыпь на коже кистей, стоп и на слизистой оболочке рта);
• миоперикардита (одышка, загрудинная боль, усиливающаяся на вдохе и ослабевающая при наклоне вперед, а также периферические отеки и нарушения ритма сердца);
• полиомиелита (лихорадка, головная боль, тошнота, боль в животе, парез или паралич конечностей или группы мышц, нарушения глотания, пронации и др.).

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

• Enterovirus-ассоциированная инфекция;
• носительство Enterovirus.

• отсутствие Enterovirus в исследуемом биоматериале.

Что может влиять на результат?

• Применение рибавирина и плеконарила может приводить к получению ложноотрицательного результата.
• Применение противовирусного иммуноглобулина не влияет на результат исследования.
• Анализ ликвора в первые 2 дня менингоэнцефалита, а также исследование отделяемого носоглотки и кала характеризуются большей частотой ложноотрицательных результатов.

Кто назначает исследование?

Инфекционист, невролог, педиатр, стоматолог, врач общей практики.

Литература

• Sawyer MH. Enterovirus infections: diagnosis and treatment. Semin Pediatr Infect Dis. 2002 Jan;13(1):40-7. Review.
• Rhoades RE, Tabor-Godwin JM, Tsueng G, Feuer R. Enterovirus infections of the central nervous system. Virology. 2011 Mar 15;411(2):288-305. Epub 2011 Jan 20.
• Ooi MH, Wong SC, Lewthwaite P, Cardosa MJ, Solomon T. Clinical features, diagnosis, and management of enterovirus 71. Lancet Neurol. 2010 Nov;9(11):1097-105.
• Smalling TW, Sefers SE, Li H, Tang YW. Molecular approaches to detecting herpes simplex virus and enteroviruses in the central nervous system. J Clin Microbiol. 2002 Jul;40(7):2317-22.
• Hsiung GD, Wang JR. Enterovirus infections with special reference to enterovirus 71. J Microbiol Immunol Infect. 2000 Mar;33(1):1-8.