Серологическая диагностика на брюшной тиф

С 8-го дня заболевания в крови у больных брюшным тифом можно обнаружить агглютинины. Для постановки реакции агглютинации необходимо иметь сыворотку больного и диагностикумы – взвеси убитых бактерий брюшного тифа, паратифы А и В (реакция Видаля). У больного из вены берут в пробирку 1-2 мл крови. Для ускорения свертывания крови пробирку ставят на 30 минут в термостат. Затем свернувшуюся кровь некоторое время дают отстояться на холоде, далее осторожно отделяют сгусток обожженной петлей от стенок пробирки, после чего сыворотку отсасывают. Кровь для» получения сыворотки можно взять и посредством укола мякоти безымянного пальца. Из сыворотки с помощью физиологического раствора готовят три ряда разведений: 1:100, 1:200, 1:400, 1:600 каждое в объеме 1 мл. Затем в пробирки с разведенной сывороткой добавляют по 1-2 капле диагностикумов тифа и паратифа А и В. Для контроля реакции в конце каждого ряда помещают пробирку, в которой смешивают по 1 мл физиологического раствора и по 1-2 капле соответствующих диагностикумов. Пробирки ставят на 2 часа в термостат, после чего учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат отмечают на второй день после стояния пробирок в условиях комнатной температуры. Реакция считается положительной при наличии агглютинации в разведении сыворотки не менее чем 1:200.

Для этиотропного лечения используют антибиотики или другие химиотерапевтические препараты.

Специфическая профилактика тифо-паратифозного заболевания проводится убитыми и химическими вакцинами по эпидемическим показаниям, контактным лицам — экстренная фагопрофилактика сальмонеллезными поливалентными бактериофагами.

Вопросы для обсуждения

1. Классификация и общая характеристика семейства энтеробактерий.

2. Патогенез брюшного тифа и паратифа А и В.

3. Методы лабораторной диагностики брюшного тифа и паратифа А и В в

различные сроки заболевания.

4. Бактериологический метод исследования брюшного тифа и

паратифа А и В в разные стадии патогенеза заболевания.

5. Выявление бактерионосительства при брюшном тифе.

6. Серологический метод диагностики брюшного тифа и паратифа А и В.

7. Лечение и профилактика брюшного тифа и паратифа А и В.

Самостоятельная работа

Бактериологическое исследование крови брюшнотифозного больного на гемокультуру:

1. Произвести посев исследуемого материала на среду Рапопорт.

2. Изучить изменение цвета среды (помутнение; наличие пузырьков газа в поплавке).

3. Пересеять на среду Эндо.

4. Занести полученные данные в протокол.

5. Изучить различия колоний на среде Эндо. Отобрать подозрительные колонии и произвести посев для накопления чистой культуры. Описать культуральные свойства.

6. Исследовать чистую культуру по морфологическим, тинкториальным, биохимическим, антигенным свойствам. Полученные данные занести в протокол.

7. Идентифицировать чистую культуру возбудителя.

Серологическая диагностика брюшного тифа

1. Учесть результаты реакции Видаля.

2. Полученные данные занести в протокол.

Протокол бактериологического исследования

Материал для исследования:

Этапы исследования Ход исследования Результаты исследования с предварительными выводами

Дата добавления: 2015-10-19 ; просмотров: 5914 . Нарушение авторских прав

Реакция Видаля. Со второй недели заболевания в крови больных накапливаются антитела против возбудителя инфекции. Для их выявления исследуют сыворотку крови больного в реакции агглютинации. В качестве антигена используют убитые культуры сальмонелл — диагностикумы.

Для постановки реакции Видаля используют сыворотку больного, набор диагностикумов, изотонический раствор натрия хлорида.

Кровь (2-3 мл) из мякоти пальца или локтевой вены собирают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию. В лаборатории пробирку ставят в термостат на 20-30 мин для образования сгустка, затем пастеровской пипеткой обводят сгусток, чтобы отделить от стенки пробирки, и ставят на 30-40 мин на холод. Отделившуюся сыворотку отсасывают и используют для постановки реакции агглютинации с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифов. Для получения сыворотки кровь можно отцентрифугировать.

При возникновении инфекционного процесса — брюшного тифа или паратифов — в организме вырабатываются О- и Н-антитела к одноименным антигенам возбудителя.

О-антитела появляются первыми и исчезают довольно быстро. Н-антитела сохраняются долго. То же самое происходит и при вакцинации, поэтому положительная реакция Видаля с О- и Н-антигенами свидетельствует о наличии заболевания, а реакция только с Н-антигенами может быть и у переболевших (анамнестическая реакция), и у привитых (прививочная). Исходя из этого, реакцию Видаля ставят раздельно с О- и Н-антигенами (диагностикумы).

Читайте также:  Klebsiella oxytoca в кале у грудничка 10 в 7 степени

Так как клинически брюшной тиф и паратифы А и В сходны, то для выявления природы заболевания сыворотку больного испытывают одновременно с диагностикумами из сальмонелл тифа и паратифа А и В.

Реакцию Видаля широко используют, так как она проста и не требует специальных условий.

Поставить реакцию можно двумя способами: капельным и объемным (см. главу 12). В практике чаще используют объемный метод. При постановке линейной реакции агглютинации количество рядов должно соответствовать количеству антигенов (диагностикумы). Возбудителем заболевания считают микроорганизм, диагностикум из которого агглютинировался сывороткой больного. Иногда отмечают групповую агглютинацию, так как возбудители тифа и паратифов обладают общими групповыми антигенами. В этом случае положительным считают результат реакции в ряду, в котором агглютинацию отмечают в большем разведении сыворотки (табл. 36).

Таблица 36. Возможный результат реакции агглютинации

Примечание. В практике реакцию Видаля ставят с четырьмя диагностикумами: брюшного тифа «О» и «Н», а паратифов А и В — с диагностикумами «ОН».

Если агглютинация возникает только в небольших разведениях сыворотки — 1:100, 1:200, то для отличия реакции при заболевании от прививочной или анамнестической прибегают к повторной постановке реакции агглютинации через 5-7 дней. У больного титр антител повышается, а у привитого или переболевшего не изменяется. Таким образом, нарастание титра антител в сыворотке крови служит показателем заболевания.

В ответ на внедрение в организм возбудителей брюшного тифа, обладающих Vi-антигеном, в крови больного появляются Vi-агглютинины. Их определяют со 2-й недели болезни, но титр их обычно не превышает 1:10. Обнаружение Vi-антител связывают с наличием в организме возбудителей брюшного тифа, поэтому определение этих антител имеет большое эпидемиологическое значение, так как позволяет выявить бактерионосителей.

Реакция Vi-гемагглютинации. Это наиболее чувствительная реакция для выявления антител.

Принцип реакции заключается в том, что эритроциты человека (I группы) или барана после специальной обработки могут адсорбировать на своей поверхности Vi-антиген и приобретают при этом способность агглютиниповаться соответствующими Vi-антителами.

Эритроциты с адсорбированными на поверхности антигенами называют эритроцитарными диагностикумами.

Для постановки реакции Vi-гемагглютинации берут:

1) сыворотку крови больного (1-2 мл); 2) эритроцитарный сальмонеллезный Vi-диагностикум; З) Vi-сыворотку; 4) О-сыворотку; 5) изотонический раствор натрия хлорида.

Реакцию ставят в агглютинационных пробирках или в пластмассовых пластинах с лунками.

Кровь у больного берут так же, как для реакции Видаля. Получают сыворотку. Из сыворотки готовят двукратные серийные разведения, начиная с 1:10 до 1:160.

По 0,5 мл каждого разведения вносят в лунку и прибавляют по 0,25 мл эритроцитарного диагностикума. Реакцию ставят в объеме 0,75 мл.

Контролем служат: 1) стандартная агглютинирующая монорецепторная сыворотка + диагностикум — реакция должна быть положительной до титра сыворотки; 2) диагностикум в изотоническом растворе натрия хлорида (контроль) — реакция должна быть отрицательной.

Содержимое лунок тщательно перемешивают, ставят в термостат на 2 ч и оставляют при комнатной температуре до следующего дня (на 18-24 ч).

Учет начинают с контроля. Реакцию оценивают в зависимости от степени агглютинации диагностикума.

Результаты учитывают по четырехкрестной системе:

++++ эритроциты полностью агглютинированы — осадок на дне лунки в виде «зонтика»;

+++ «зонтик» меньше, не все эритроциты агглютинировались;

++ «зонтик» маленький, на дне лунки имеется осадок из неагглютинированных эритроцитов;

— реакция отрицательная; эритроциты не агглютинировались и осели на дно лунки в виде пуговки.

1. В какой период заболевания ставят реакцию Видаля?

2. Какие ингредиенты необходимы для постановки реакции Видаля?

3. С какими диагностикумами ставят реакцию Видаля?

4. Какая из серологических реакций является самой чувствительной при диагностике тифопаратифозных инфекций?

Читайте также:  В заднем проходе появилась шишка болит что это

5. Каким диагностикумом пользуются при постановке реакции Vi-гемагглютинации?

6. Какой сывороткой определяют наличие Vi-антигена у исследуемой культуры?

7. Какое значение имеет определение Vi-фаготипа?

Возьмите у преподавателя О- и Н-диагностикумы из сальмонелл тифа, паратифа А и паратифа В и сыворотку больного. Поставьте реакцию Видаля.

Питательные среды

Среды ЭМС, Плоскирева, висмут-сульфитный агар выпускаются медицинской промышленностью в виде сухого порошка. Их готовят согласно указаниям на этикетке: отвешивают определенное количество порошка, наливают соответствующее количество воды, кипятят и разливают в стерильные чашки Петри.

Среда Рассела. В 950 мл дистиллированной воды добавляют 40 г сухой питательной среды и прибавляют 5 г питательного агара. Нагревают до кипения и растворения порошков. В 50 мл дистиллированной воды растворяют 1 г х. ч. глюкозы и добавляют к приготовленной смеси. Среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл, стерилизуют текучим паром (2 дня по 2 мин) и скашивают так, чтобы оставался столбик. Среду Рассела с маннитом и сахарозой готовят так же.

Среда Олькеницкого из сухого агара. 2,5 г сухого питательного агара расплавляют в 100 мл дистиллированной воды. В остуженный до 50° С агар прибавляют все ингредиенты, указанные в рецептуре (этикетке). Среду, разлитую в пробирки, стерилизуют текучим паром (3 дня по 20 мин) и затем скашивают. Готовая среда должна быть бледно-розового цвета.

Дата добавления: 2016-11-22 ; просмотров: 800 | Нарушение авторских прав

Тема: Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Цель: Освоение методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа и паратифов А и В.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Содержательный модуль 10. Патогенные прокариоты и эукариоты.

Тема занятия 25. Серодиагностика брюшного тифа, паратифов А и В. Сальмонеллы – возбудители острых гастроэнтеритов.

Сальмонеллез – острая кишечная инфекция. характеризующаяся преимущественным поражением желедочно-кишечного тракта, возбудителями которой являются многочисленные бактерии рода Salmonella (кроме S. typhi, S, paratyphi A, S. schottmuelleri).

Таксономическое положение и свойства. см. в методичке 26.

Морфология и тинкториальные свойства.

Эпидемиология. Основной источник заболевания – животные, преимущественно домашние и птицы. Реже источниками заболевания являются люди – больные и носители. Механизм заражения – фекально-оральный. Основной путь передачи инфекции – пищевой. Факторами передачи могут быть не только мясо животных и птиц, инфицированное при жизни животного либо при его обработке, но и яйца. Наиболее восприимчивы к заболеванию люди со сниженным иммунным статусом (в том числе грудные дети) и больные, получающие антибиотики. Подъем заболеваемости наблюдается летом.

Патогенез. Сальмонеллы проникают в организм через рот, достигают тонкого кишечника, где и развертывается патологический процесс. Бактерии благодаря факторам адгезии прикрепляются к слизистой оболочке, проникают в ее глубокие слои, где захватываются макрофагами. Сальмонеллы размножаются и погибают с освобождением эндотоксина, который, помимо общей интоксикации, вызывает диарею и нарушение вводно-солевого обмена. Находящаяся в нормальном состоянии микрофлора кишечника в значительной мере препятствует накоплению сальмонелл. В некоторых случаях (при снижении иммунного статуса и высокой вирулентности возбудителя) возможно развитие бактериемии и поражение костей, суставов, мозговых оболочек и других органов.

Клиническая картина. Инкубационный период равен в среднем 12-24 часа. Заболевание характеризуется повышением температуры, тошнотой, рвотой, поносом, болью в животе. Как правило, продолжительность болезни составляет 7 дней. но в некоторых случаях наблюдается молниеносная токсическая форма, приводящая к смерти больного.

Иммунитет после перенесенного заболевания сохраняется менее года.

Микробиологическая диагностика. Основной материал для исследования — рвотные массы, испражнения, промывные воды желудка. Применяют бактериологический и серологический (РА, РПГА) методы диагностики.

Лечение сальмонеллеза заключается в промывании желудка, диете, введении жидкостей для нормализации вводно-солевого обмена. Антибиотики при формах средней тяжести и легких не назначают, т.к. их применение приводит к дисбактериозу и в результате более длительному течению болезни; кроме того, очень велико число антибиотикорезистентных сальмонелл.

Читайте также:  Почему в середине цикла болит живот

Профилактика неспецифическая — санитарно-гигиенические мероприятия, заключающиеся, в частности, в правильной кулинарной обработке мяса и яиц.

Серологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А и В.

Для постановки диагноза применяется реакция агглютинации Видаля, основанная на обнаружении в сыворотке крови людей агглютининов, которые появляются в конце 1-й — начале 2-й недели заболевания. Особенности реакции заключаются в том, что реакция ставится одновременно с 4 разными диагностикумами (антигенами): ОН-диагностикум брюшного тифа, О-диагностикум брюшного тифа, ОН-диагностикум паратифа А и ОН-диагностикум паратифа В. Брюшнотифозные монодиагностикумы применяются для установления стадии болезни, т.к. содержание О- и Н-антител в разные ее периоды неодинаково. О-антитела накапливаются в разгвр заболевания и исчезают к моменту выздоровления. Н-антитела появляются к концу заболевания и сохраняются у переболевших в течение длительного времени.

У больных брюшным тифом в сыворотке крови определяются О- и Н-антитела, а в сыворотке крови людей, перенесших брюшной тиф или вакцинированных против него, сохраняются только Н-антитела.

Для серологического исследования реконвалесцентов и выявления бактерионосителей широко используют реакцию пассивной Vi-гемагглютинации (РПГА), с помощью которой определяют Vi-антитела в сыворотке крови людей, появляющиеся только к концу заболевания, но постоянно обнаруживающиеся у носителей брюшного тифа.

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией представителей семейства Salmonella.

Описывать патогенез сальмонеллезов.

Изучить методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Ознакомиться с методами серологической реакции брюшного тифа, паратифов А и В.

Ознакомиться с методами профилактики и специфической терапии брюшного тифа, паратифов А и В.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Проводить дифференциацию сальмонелл – возбудителей сальмонеллезов.

Забирать материал для исследования от больных сальмонеллезами.

Выделять чистые культуры сальмонелл.

Трактовать результаты бактериологического и серологического исследования.

Сальмонеллы – возбудители пищевых токсикоинфекций.

Антигенная структура, факторы патогенности.

Патогенез и иммуногенез заболеваний. Бактерионосительство.

Методы микробиологической диагностики сальмонеллезов.

Специфическая профилактика и лечение сальмонеллезов.

Практические задания, выполняемые на занятии:

Выделение чистой культуры S. typhi :

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis.

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и иммунологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиология.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики сальмонеллезов и серологической диагностики брюшного тифа, паратифов А и В. Далее студенты знакомятся с правилами забора материала от больных сальмонеллезами для бактериологического и серологического исследования. Потом продолжают выделение чистой культуры S. typhi :

Проверка чистоты культур: приготовление мазков, окраска по Грамму, микроскопия и зарисовывание.

Пересев чистой культуры на среду Гиса и МПБ для выявления индола и сероводорода.

Постановка реакции агглютинации на стекле с диагностическими сыворотками для идентификации выделенной чистой культуры.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных микропрепаратов чистых культур S. typhimurium, S. choleraesuis, S. enteritidis и зарисовывают их в протокол.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

Читайте также:
Adblock
detector